人體醣解酵素PGK-1 (2)

應用基因轉殖鼠建立三維心臟模式進行心血管疾病藥物篩檢與基因功能檢測之研究(I)：
綠色螢光蛋白表現基因Pgk-1/GFP基因轉殖鼠與不連續心臟螢光剖面圖之建立

作者: 吳希天
日期: 2006-10-30

摘要: 心血管疾病近年來高居國人十大死因的前五名，除和個人的生活習慣與生活環境有密切關係外，也和遺傳基因相關。與心血管疾病直接與間接相關的基因，隨著人類及小鼠、大鼠基因序列的解開而逐漸的被發現，也成為近年來生物學家研究的方向之ㄧ。以小鼠之心臟為試驗的模式，探討基因的功能及心血管疾病藥物之反應，以作為疾病檢測與藥物篩選之試驗模型，成為比體外培養試驗更具指標性與真實性的工具。磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate kinase, PGK）為生物體重要的酵素之ㄧ，參與 ATP、ADP 互相間轉換之催化作用。在醣解作用葡萄糖轉換成丙酮酸鹽之過程，PGK 參與 1,3-diphosphoglycerate 轉換成3-phosphoglycerate 之反應，可釋放出 1 分子 ATP；逆向反應則釋放出 1 分子ADP。大多數細胞，如好氧性生物之醣解作用，厭氧性生物之發酵作用，或植物之固碳作用，皆需要 PGK 之參與。Pgk-1 啟動子則具有廣效性的驅動基因轉錄作用 。 本試驗以建立心血管疾病藥物篩檢與基因功能檢測之實驗鼠心臟模式為目標，已成功產製Pgk-1/GFP 基因轉殖鼠，並予以純系化，成為廣效性表現GFP之新品系小鼠FVB/NCrl-Tg(PGK1-GFP)Narl 與C57BL/6J- Tg(PGK1-GFP)Narl。本試驗利用 GFP 在基因轉殖鼠體內各組織臟器的表現，進行冷凍切片與石蠟包埋切片觀察，嘗試構建小鼠重要臟器 GFP 螢光圖譜。試驗抽取基因轉殖小鼠血液，經溶血後取白血球，以流式細胞儀檢測 GFP 在基因轉殖鼠白血球表現之分佈；另以細胞抹片離心機收集白血球，螢光顯微鏡下觀察不同族群白血球螢光之表現 ， 實驗結果顯示兩種基因轉殖小鼠的血液細胞族群均呈現出一致的血液細胞族群間相對螢光強度。試驗亦嘗試由 GFP 基因轉殖鼠骨髓細胞及脂肪細胞，建立起類骨髓幹細胞與類脂肪幹細胞，並獲得初步的結果。本計劃的執行，期盼GFP 基因轉殖鼠初步的成果，可在生物醫學的研究上提供更有價值的應用材料與基礎資料，後續並將針對心血管疾病藥物篩檢與基因功能檢測進行具體的研究與探討。

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Item 987654321/652